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鹦鹉性别检测试剂

鹦鹉性别检测试剂

更新时间:2023-07-31

产品型号:

产品价格:电议

产品品牌:万象环境

鹦鹉性别检测试剂又称鹦形目性别核酸检测试剂盒,鹦鹉性别检测试剂支持单通道仪器,标配双通道16孔仪器,鹦鹉性别检测试剂可对鹦鹉的羽毛、血液及组织等样品中CHD-W保守基因进行扩增检测,进而对鹦鹉性别进行鉴定。
产品详情

鹦鹉性别检测试剂又称鹦形目性别核酸检测试剂盒,鹦鹉性别检测试剂支持单通道仪器,标配双通道16孔仪器,鹦鹉性别检测试剂可对鹦鹉的羽毛、血液及组织等样品中CHD-W保守基因进行扩增检测,进而对鹦鹉性别进行鉴定。

鹦形目性别核酸检测试剂盒(带内参,PCR-荧光探针法  

本试剂盒可对鹦鹉的羽毛、血液及组织等样品中CHD-W保守基因进行扩增检测,进而对鹦鹉性别进行鉴定。通过引入内源性内参可对核酸提取和扩增过程进行监测,确保检测结果的准确性。  

产品内容:  

试剂组分  

AN2304002-03(100T)  

CW反应液  

1150µL  

CW预混液  

1150µL  

CW阳性对照  

100μL  

阴性对照  

100μL  

储存条件:  

-20℃条件下保存,有效期至少12个月。  

实验操作:  

1. 样本制备(样本制备区)  

1.1样本要求:  

羽毛:采集胸部、腹部或腿部羽毛(含羽根部分)不少于5根,切勿使用自然脱落的羽毛。  

全血:使用EDTA作为抗凝剂,切勿使用肝素抗凝,要求使用新鲜全血,或在2~8℃不超过7天,或在-20℃条件下保存不超过3个月,应尽量避免反复冻融。  

组织:采取新鲜肌肉或器官组织(尽可能不使用皮或者筋膜等不易处理样本)不超过100mg,使用200-500μL无菌水制备组织匀浆液,再进行后续样本制备。  

1.2样本制备:  

请参照三狮生物《动物基因组DNA快速提取试剂盒(PCR分析用)说明书》(货号:DP202),或其他符合相关要求的核酸提取试剂盒/方法,对处理后的样品进行核酸提取。提取的样品核酸放置于冰盒中,并尽量及时进行检测,4℃保存不超过7天或-20℃保存不超过6个月。  

2. 配制反应体系(加样区)  

2.1 取出试剂盒中各组分,室温条件下完全解冻,离心10秒,将管壁和管盖内的液体离心至管底;按样本数量(n+2)(即n个待检样本+1个阳性对照+1个阴性对照)配制反应体系,具体配制方法如下:分别吸取((n+2)× 11.5µL CW反应液+(n+2)× 11.5µL CW预混液)加入洁净离心管中,移液器吹吸充分混匀,分装至PCR管中,每孔23μL,放在冰盒中备用。  

2.2 然后向反应液中依次添加2μL阴性对照、提取的样本核酸和CW阳性对照,盖好管盖,做好记录,每个反应总体积为25μL。充分混匀,离心10秒后在PCR仪上进行扩增实验。  

3. PCR扩增(扩增及产物分析区)  

95℃预变性3分钟;95℃变性10秒,58℃退火延伸30秒,35个循环,在58℃时收集荧光信号。荧光第一通道选择FAM(CHD-W基因),第二通道选择VIC/HEX(内源性内参基因)(使用ABI系列实时荧光定量PCR仪,若有需求可提前联系厂家或自行添加ROX校正染料;否则参照正常程序进行)。   

4. 结果判定  

4.1 阳性对照FAM通道和VIC/HEX通道的Ct值均<28且出现“S”型扩增曲线,阴性对照无Ct值或Ct值≥35且无“S”型扩增曲线,实验结果有效;否则应重新进行实验,如重测实验仍无效,请与厂家技术人员联系。  

4.2 样本VIC/HEX通道的Ct值应≤30且出现“S”型扩增曲线,表明样本提取和扩增有效;如VIC/HEX通道无Ct值或Ct值为30<Ct≤35,表明样本核酸提取不达标或存在较强抑制干扰物(如酒精等消毒剂、抗凝剂等残留)抑制扩增,建议重新处理样本进行核酸提取及扩增;  

4.3 样本VIC/HEX通道检测有效后,再进行FAM通道的判定:  

Ct值≤30且出现“S”型扩增曲线,且两通道Ct差值小于5,判定为CHD-W基因阳性,表明样本来源于雌性;  

Ct值≤30且出现“S”型扩增曲线,但两通道Ct差值≥5,或Ct值为30<Ct<32,则均判定为可疑,建议进行复测(建议先排除环境气溶胶污染导致的“假阳性”结果,再重新进行核酸提取及检测),如排除气溶胶污染后FAM通道复测Ct值<30,且有明显的扩增曲线,两通道Ct差值小于5,判定为CHD-W基因阳性,否则判定为阴性;  

无Ct值或Ct值≥32且无“S”型扩增曲线,判定为CHD-W基因阴性,表明样本可能来源于雄性。  

注意事项:  

1)为了防止污染,实验需要严格进行分区操作,分区之间最好进行物理性隔离,避免人为因素造成交叉污染。实验过程中穿戴工作服和乳胶手套,不同区域独立使用工具,需更换手套和实验服。PCR结束后,切勿立即开盖,充分冷却后再开盖取样,最大程度避免气溶胶污染。  

2)试剂使用前要完全解冻,但应避免反复冻融。试剂配制和加样等步骤请严格按照说明书要求进行操作。操作台、离心机及移液器等仪器应定期使用含氯消毒剂、消毒酒精、核酸污染清除剂或紫外灯进行消毒。  

3)检测结果为阴性,并不完全代表为雄性,核酸样本发生未知突变、质量不合格、载量过低、存在较强干扰抑制物导致核酸提取(检测)不成功亦会产生“阴性”结果。本试剂盒仅用于鹦鹉中CHD-W基因的特异性扩增,涉及的其他产品请详询生产厂家。  

4)本品为一次性用品,试剂中的组分对于自然光较为敏感,分装及保存时注意遮光,请勿反复冻融,仅供科学研究,不用于临床诊断等其他用途。  



产品地址:http://www.qxhjjc.com/swjd/592.html